试剂盒的适用样本范围及具体要求有哪些？
NadPrep®DNA 通用型文库构建试剂盒兼容多种类型样本的文库构建，包括全血 gDNA、FFPE、血浆 cfDNA 等。对于复杂样本的处理（如 FFPE 组织样本），推荐从源质控。样本应选取合适的提取试剂盒，并进行相应的定量及片段质检，建议如下：
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类别 |
要求 |
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提取试剂盒 推荐 |
常规 gDNA |
血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒（天根；货号：DP304） |
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cfDNA |
QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit（Qiagen；货号：55114） |
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FFPE 组织 gDNA |
QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (Qiagen；货号：56404） |
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溶剂 |
推荐使用无核酸酶水、0.1 × TE（low TE）、10 mM Tris-HCl（pH 8.0~8.5）或提取试剂盒配备的 Buffer溶解 DNA 样品。酶切片段化试剂多对 EDTA 浓度敏感，应避免使用含 EDTA 的溶剂溶解。如有必要可进行1.8-2.0 ×磁珠纯化去除。 |
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定量 |
基于分光光度计原理的 NanoDrop 和基于双链 DNA 荧光染料的Qubit®、PicoGreen®进行定量。 |
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纯度 |
OD260/OD280=1.8~2.0；OD260/OD230=2.0~2.5。OD260/OD280>1.9表明有RNA污染，<1.6表明有蛋白质、酚等污染；OD260/OD230<2.0，则表明有碳水化合物、盐类或者有机溶剂污染。 |
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片段分布 |
常规 gDNA |
1% 的琼脂糖凝胶电泳时，>15 kb 的清晰主带。 |
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cfDNA |
Bioanalyzer或 Bioptic（Qsep）分析主峰~160 bp，次峰~320 bp。 |
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FFPE 组织 gDNA |
1% 的琼脂糖凝胶电泳或生物分析仪，如 Agilent 2100 进行样本完整性评估。 |
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