单独合成 单独质检
表 1. 每条探针分析的检测示例。
NGS QC
表 2. NGS QC 检测内容及结果示例。

图 4. DNACap panel 的捕获表现。人类男性基因组 DNA (Promega, G1471) 样本利用 NadPrep® DNA Library Preparation Kit (for Illumina®) 构建文库,分别采用 3 个定制 panel 完成杂交捕获,测序平台:Illumina NovaSeq 6000, PE 150。 A. 中靶率、靶区域覆盖度及 Fold 80;B. 靶区域覆盖均一性及一致性。

图 5. RNACap panel 的捕获表现。人类男性基因组 DNA (Promega, G1471) 样本利用 NadPrep® DNA Library Preparation Kit (for Illumina®) 构建文库,采用定制 500 基因 RNACap panel 完成杂交捕获,测序平台:Illumina NovaSeq 6000, PE 150。 A. 不同 GC 含量区域覆盖度;B. 靶区域覆盖均一性。

图 6. MethylCap panel 的捕获表现。类男性基因组 DNA (Promega, G1471) 样本利用 NadPrep® Methyl Library Preparation Kit (for Illumina®) 经重亚硫酸盐方法转化后构建文库,采用定制 50 Kb MethylCap panel 完成杂交捕获,测序平台:Illumina NovaSeq 6000, PE 150。 A. 不同 GC 含量区域覆盖度;B.靶区域覆盖均一性。
仅限研究使用,不用于临床诊断。
转录组测序 (RNA-Seq) 文库制备一般分为常规性和链特异性两类,其核心差异在于是否在测序文库中保留转录本的方向性信息。其中,链特异性文库在制备过程中保留了转录本的方向性,测序与下游分析时可判定转录本来源于 DNA 的正义链还是反义链;而常规性文库在 cDNA 合成过程中会丢失方向性信息,测序数据无法直接区分转录方向。与常规性 RNA-Seq 相比,链特异性 RNA-Seq 更能准确地统计转录本数量,明确基因结构,同时识别反义转录本以及发现更多新转录本,因此是研究基因结构与表达调控的重要手段。总体而言,文库制备方法的选择应基于实验目的、成本预算及参考转录组的可用性等因素;若需获取转录本方向性信息,应优先选择链特异性文库。无论选择何种方案,均应严格按照试剂盒使用说明书执行相应操作以确保数据质量。
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