文库长度分布可通过凝胶电泳、Bioanalyzer或者 Bioptic(Qsep)等生物分析系统进行检测,但应注意不同分析仪器的文库片段读数可能会存在一定的偏差。常见的异常文库片段分布原因如下:
异常峰型 |
产生原因 |
解决办法 |
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有短片段(~100 bp)小峰 |
接头冗余 |
合适的Input DNA量和接头使用量;注意加样及连接条件 |
有双峰(额外单个短片段峰) |
过度扩增 |
降低Input DNA量,降低扩增循环数 |
额外有长片段峰 |
磁珠残留 |
纯化步骤时小心操作,以去除全部磁珠 |