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文库构建结果出现峰型异常的原因及解决办法?

浏览量:1230 / 发布时间:2020-11-05

文库长度分布可通过凝胶电泳、Bioanalyzer或者 Bioptic(Qsep)等生物分析系统进行检测,但应注意不同分析仪器的文库片段读数可能会存在一定的偏差。常见的异常文库片段分布原因如下:

异常峰型

产生原因

解决办法

有短片段(~100 bp)小峰

接头冗余

合适的Input DNA量和接头使用量;注意加样及连接条件

有双峰(额外单个短片段峰)

过度扩增

降低Input DNA量,降低扩增循环数

额外有长片段峰

磁珠残留

纯化步骤时小心操作,以去除全部磁珠