双筛适合哪些情况，其损耗及注意事项有哪些？

适用于片段化后 DNA 分布范围较宽且期望得到稳定的数据产出的情况。但获得狭窄峰型也会降低文库丰度，故操作少量样本时应注意损耗。双筛分为片段化后双筛、连接后双筛两种。在双筛的过程中短片段损失更多但分布更集中，而长片段与之相反。由于连接后双筛时已引入了接头，因此相对片段化后双筛损失更少，但峰型相对较宽。此时还应注意：

•  任意形式的双筛都会带来 DNA 的损耗，因此扩增循环数需要至少增加 1 个循环；

•  任意形式的双筛都会带来原始文库丰度的损耗，可能会导致测序数据中的重复率的增加；

•  打断片段的平均大小应接近预期片段大小，以减少样本损失。