| 可能原因 | 解决方案 |
| 片段化 DNA 投入量过低 | 酶切产物回收效率在 10% 左右，为保证有足够的酶切产物进行建库，可将足量的原始样本分多管同时进行酶切 |
|
可能原因 |
解决方案 |
|
起始投入量过量 |
建议使用 Qubit™ 3.0 进行定量 |
|
扩增循环数偏高 |
根据操作指南推荐摸索最佳扩增循环数 |
|
洗脱过程未按照操作指南进行，导致脱靶严重 |
洗脱过程严格按照操作指南要求进行操作 |
|
可能原因 |
解决方案 |
|
起始投入量不准确 |
实际起始投入量偏低，建议使用 qPCR 进行精确定量 |
|
转管时未将反应液全部转出 |
转管时务必将每一步的溶液全部转移至新的反应管 |
|
杂交以及磁珠纯化过程丢弃部分磁珠 |
洗脱过程操作避免过于剧烈，弃上清过程切勿丢失磁珠 |
|
可能原因 |
解决方案 |
|
洗脱过程产生大量气泡 |
移液器使用时需轻柔吹吸混匀，避免进入空气；若产生气泡，可先用移液器将液面上方气泡吸干净后再弃上清 |
|
未更换 PCR 管盖 |
严格按照说明书要求更换 PCR 管以及管盖 |
|
试剂未完全混匀 |
试剂使用前严格按照操作指南要求进行混匀，并置于相应的温度预热 |
依赖于自有核酸合成工厂的全流程精准把控，自接收 MRD 订单的第一天启动高通量全自动合成 Probe，第二天依次完成修饰合成、氨解、洗脱定量、质控 (若不符合质控标准，则同步启动重合)、分装等；第三天依次完成重合分装、抽干、分装及 Panel 生产和产品包装发货等；确保 3 个工作日内交付。
建议使用纳昂达全套系列产品。
μCaler® MRD Solution 中核心组分均来源于国产，无需担心供货周期的问题。
30 min- 16 hr 杂交捕获性能基本一致，推荐选择 1 hr 为最佳平衡。
如何提高 NGS 方案对于低频突变信号的检出率？
① 增加样本投入量：样本起始量越多，支持低频突变检出的模板拷贝数越多；
② 增加跟踪突变数量：突变位点数量越高，检出概率越高。
 |
|
Abbosh C, Birkbak N J, Swanton C. Early stage NSCLC—challenges to implementing ctDNA-based screening and MRD detection[J]. Nature Reviews Clinical Oncology, 2018, 15(9): 577-586.
Van Der Pol Y, Mouliere F. Toward the early detection of cancer by decoding the epigenetic and environmental fingerprints of cell-free DNA[J]. Cancer cell, 2019, 36(4): 350-368.
Van Der Pol Y, Mouliere F. Toward the early detection of cancer by decoding the epigenetic and environmental fingerprints of cell-free DNA[J]. Cancer cell, 2019, 36(4): 350-368.