本试剂盒专门针对 RNA & DNA 共提取进行了优化,可从同一份样本中同时提取病毒、细菌和真菌等病原微生物的 RNA 和 DNA,所得产物为混合核酸。如下游应用仅需要 RNA 或 DNA,可根据具体实验需求,在提取后增加相应的核酸酶处理步骤。相关处理条件应根据下游应用需求及所使用核酸酶产品的说明书进行设置,并经实验验证。
本试剂盒采用机械裂解与化学裂解相结合的方式进行样本裂解,可用于真菌 (如酵母菌、念珠菌) 和革兰氏阳性细菌等细胞壁较厚微生物的核酸提取。对于此类样本,应按照本使用说明书要求进行裂解,以确保核酸充分释放。实际提取效果可能受样本类型、病原体含量及样本处理等因素影响。
• 样本:血液样本保存不当、反复冻融或保存时间过长,可能会影响 DNA 提取产量。建议按照推荐条件保存和处理血液样本,并尽量避免反复冻融。
• 试剂:Blood-Wash Buffer 1 和 Blood-Wash Buffer 2 未按照要求加入相应体积的无水乙醇,可能影响洗涤效果及最终 DNA 回收率。首次使用前,应按照瓶身标签要求加入无水乙醇,充分混匀并做好标记。
• 操作:血液样本完成裂解后,应待反应液平衡至室温,再依次加入异丙醇和 Blood-Magnetic Beads,并充分混匀,以保证磁珠与 DNA 充分结合。应避免加入异丙醇后先进行混匀,再加入 Blood-Magnetic Beads,以免影响磁珠吸附 DNA 的效果。
本试剂盒可用于分离血浆后的浓缩血样本。对于 100 μL 浓缩血样本,可参考本说明书 200 μL 血液样本的提取流程进行操作;如实际样本量发生变化,建议根据使用说明书中不同样本量的操作要求调整样本处理方式及相关试剂用量。
可以。本试剂盒推荐的标准上样量为 200 μL。对于其他体积的血液样本,具体处理方式请参考使用说明书【实验步骤】中关于不同样本量的处理要求。
对于上样量为 200-1000 μL 的血液样本,如无红细胞裂解液,也可根据已验证的预处理方法进行处理。例如,在血液样本中加入 3 倍体积 1X PBS (如:300 μL 血液加入 900 μL 1X PBS),充分颠倒混匀后,以 2,000 × g 离心 5 min。使用移液器吸取移弃上清,加入 200 μL 1X PBS,涡旋振荡混匀后,按照基因组 DNA 提取流程进行操作。
主要通过以下几个方面实现:
• 优化酶学反应,精简操作流程:通过对关键酶原料、体系配制及反应条件进行系统性优化,在省略二链 cDNA 合成步骤的同时,实现 RNA & DNA 杂合连和双链 DNA 的同步片段化、末端修复 & 加 A 处理,有效减少操作步骤,加快实验进程。
• 降低非目标干扰,提升扩增效率:采用优化的扩增体系设计,结合 PCR Enhancer 有效降低接头二聚体及非特异性扩增产物的形成,提高目标文库富集效率,从而省去连接产物纯化步骤,进一步缩短实验时间。
• 提升样本兼容性,增强适配能力:针对混合感染或低载量/低丰度病原体样本进行专项优化,支持更大的模板投入空间,在保证文库产出稳定性和一致性的同时,进一步提升病原体的检出能力。